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荧光强度分析是论文常用技能之一，它可以量化荧光强度，从而进行对比分析或统计分析，得出可信的结果。今天我们就来介绍下如何用明美显微数码测量分析系统和ImageJ快速实现径向荧光强度分析。

近期聚苯乙烯纳米颗粒论文中使用的荧光强度分析①

一、能量曲线工具

能量曲线工具在右下角

能量曲线是明美显微数码测量分析系统的工具之一，它可以直观呈现径向直线上荧光强度变化，具有方便易用，结果直观的优点。

能量曲线使用效果

能量曲线使用非常简单，选中工具后可以在成像窗口或图片上画线，然后系统就会在线上生成一个曲线图，红蓝绿三色荧光分别呈现为红蓝绿三色曲线。曲线图以用户画的线为X轴，以光强为Y轴，Y轴有100%和50%两条线，可快速估算荧光强度。

红色荧光上使用效果

能量曲线在单色荧光中，可用于快速判断荧光强度，从而进行对比获得科研灵感，或用于曝光控制，避免ROI的目标过度曝光导致重要的细节信息丢失。而在多色荧光中，能量曲线还可以用于快速判断荧光共定位情况。

二、ImageJ/FIJI量化分析

FIJI直线工具

能量曲线方便易用，直观快速但不够量化，要更量化地进行径向荧光强度分析，需要用到ImageJ或者说FIJI（JIFI是更新版的ImageJ）.首先打开荧光图片，使用直线工具画线，注意画线对比时长度数据要一致。

转换为8bit图像

我们这个荧光图是单色荧光，因此我们这里先将其转化成8bit格式，减少其他通道信号可能带来的问题，在菜单选项选择Image-Type-8bit.

打开Plot Profile

下一步打开Plot Profile，可以从菜单Analyze-Plot Profile打开，也可以直接按键盘的K键打开，打开后会呈现直线光强的曲线图。

保存数据

点击曲线图窗口的Data-Save Data，可以将数据导出成CSV格式，然后就可以用Excel或者Origin之类工具打开进行后续的数据统计分析或者曲线图绘制了。

复制全部数据

除了Data-Save Data导出成文件以外，还能使用Data-Copy All Data将数据复制到剪切板，然后直接在已经打开的Excel中进行粘贴，减少保存多个数据文件的麻烦。

Excel中曲线图绘制

一个小提醒，如果想在Excel里做出像上面论文的图片，可能还需要经过数据处理，前列是像素，需要根据软件标尺换算成尺寸，通常是μm；后列是荧光强度，因为数据是8bit的，因此数值是0-255，按255为100%做个换算来画Y轴。

今天的文章分享就到这里，希望对大家的日常工作有帮助，如您有想了解的使用技巧，也欢迎向我们提出。

引用文献：

①Sun, H., Yang, B., Li, Q. et al. Polystyrene nanoparticles trigger aberrant condensation of TDP-43 and amyotrophic lateral sclerosis-like symptoms. Nat. Nanotechnol. (2024). https://doi.org/10.1038/s41565-024-01683-5